SARS-CoV-2 Spike amyloïde fibrillen specifiek en selectief versnelt amyloïde fibrilvorming
Abstract
Een toenemend aantal rapporten suggereren een associatie tussen COVID-19 infectie en initiatie of versnelling van neurodegeneratieve ziekten (NDs) waaronder de ziekte van Alzheimer (AD) en de ziekte van Creutzfeldt-Jakob (CJD). Beide ziekten en verschillende andere neurodegeneratieve ziekten worden veroorzaakt door de omzetting van menselijke eiwitten in verkeerd gevouwen, geaggregeerde amyloïde fibrillen. Het proces van fibrilvorming zet zichzelf voort door zaadvorming vanuit vooraf gevormde fibrilzaden. zaden. We hebben onlangs een aannemelijk mechanisme beschreven voor amyloïde fibrilvorming van SARSCoV-2 spike-eiwit. Spike-eiwit vormde amyloïde fibrillen na splitsing door neutrofiele elastase, overvloedig aanwezig in de ontstekingsreactie op COVID-19 infectie.
We leveren hier het bewijs van een significante versnelling van de amyloïde fibrillen door spike-amyloïd vorming van CJD-geassocieerd humaan prioneiwit (HuPrP) met behulp van een in vitro conversietest. Door de HuPrP-conversietest te voeden met andere in vitro gegenereerde ziektegeassocieerde amyloïde fibrillen tonen we aan dat dit geen algemeen effect is, maar een specifiek kenmerk van spike-amyloïde fibrillen.
We toonden ook aan dat de amyloïde fibrilvorming van AD-geassocieerde Aβ1-42 werd versneld door zaden van spike-amyloïde fibrillen. Van zeven verschillende 20-aminozuur lange peptiden was Spike532 (532NLVKNKCVNFNFNGLTGTGV551) het meest efficiënt in het zaaien van HuPrP en Spike601 (601GTNTSNQVAVLYQDVNCTEV620) was het meest effectief in het zaaien van Aβ1-42. Dit suggereert substraatafhankelijke selectiviteit, Dit suggereert substraatafhankelijke selectiviteit van de cross-seeding activiteit.
Hoewel puur in vitro, suggereren onze gegevens dat cross-seeding door spike-amyloïde fibrillen kan worden betrokken kan zijn bij het toenemende aantal meldingen van CJD, AD en mogelijk andere neurodegeneratieve ziekten in het kielzog van COVID-19.
Inleiding
Amyloïden en virussen zijn beide berucht om hun schadelijke effect op de menselijke gezondheid. Er zijn ook veel manieren waarop kruisbestuiving tussen deze twee ziekteveroorzakende entiteiten resulteert in een toenemend risico op schade aan de gastheer [1]. Verschillende neurodegeneratieve ziekten (NDs) zijn nauw verbonden gerelateerd aan misvouwing en amyloïdvorming van endogeen tot expressie gebrachte eiwitten. Echter, onderzoek heeft tot op heden echter niet kunnen beschrijven waarom sommige ziekten wel en andere niet het slachtoffer worden van deze ziekten. In een retrospectieve studie van 800.000 individuen uit biobanken in Finland en het Verenigd Koninkrijk werd duidelijk dat infectie met enkele van onze meest voorkomende virussen, zoals influenza en herpes zoster in verband staan met een verhoogd risico op enkele van de meest voorkomende neurodegeneratieve ziekten zoals de ziekte van Alzheimer (AD) en de ziekte van Parkinson (PD) [2].
De neurologische manifestaties van COVID-19 zowel in de acute fase als op de lange termijn van SARS-CoV-2 infectie zijn op grote schaal waargenomen en beschreven tijdens de COVID-19 pandemie [3]. De belangrijkste verklaring hiervoor is neuroinflammatie [4, 5, 6, 7].
Neuro-inflammatie is een gemeenschappelijke noemer van neurodegeneratieve ziekten [8, 9, 10, 11]. De specifieke rol van neuroinflammatie bij prionziekten werden onlangs besproken [12].
ND’s worden specifiek geassocieerd met misvouwing en amyloïdvorming van intracerebrale eiwitten. AD is gekoppeld aan de vorming van extracellulaire amyloïde plaques met het Aβ peptide als hoofdbestanddeel en intracellulaire neurofibrillaire tangles die bestaan uit Tau-eiwit. Prion ziekten worden veroorzaakt door de misvouwing en aggregatie van het prioneiwit, PrP, dat overvloedig aanwezig is op het extracellulaire oppervlak van alle neuronale cellen bij zoogdieren. Hoewel elke ziekte geassocieerd is met zijn eigen set verkeerd gevouwen eiwitten, wijst steeds meer bewijs in de richting van de mogelijkheid van kruisbestuiving, dat wil zeggen dat amyloïden gevormd door één type eiwit de amyloïdvorming van een ander eiwit kan uitlokken [13, 14, 15].
Van verschillende SARS-CoV-2 eiwitten is bekend dat ze amyloïde vormen. De eiwitten vertaald uit virale open reading frame genen (ORF’s) zijn vaak intrinsiek ongeordend en/of vouwen zich alleen op in de context van het virale deeltje [16]. ORF6 en ORF10 van SARS-CoV-2 zijn amyloïdogenen [17] en de resulterende amyloïden vertonen neurotoxische eigenschappen op gekweekte cellen [17]. Nucleocapsid eiwitten (NCAP’s) zijn cruciaal voor de assemblage van virale deeltjes. Deze eiwitten bevatten laagcomplexe domeinen die belangrijk zijn voor de zelfassemblage van het virusdeeltje, maar de complementariteit tussen aangrenzende polypeptideketens kan ook de vorming van amyloïde structuur bevorderen [18]. Het laagcomplexe domein van SARS-CoV-2 NCAP vormt amyloïd in vitro [19] en dit amyloïde werd onlangs voorgesteld als kandidaat-geneesmiddel voor de behandeling van COVID19 [19].
De SARS-CoV-2 Spike-eiwitten vormen amyloïd wanneer ze gesplitst worden door neutrofiele elastase [20]. Elastase is overvloedig aanwezig in covid geïnduceerde ontsteking [21, 22]. Amyloïd afkomstig van het SARSCoV-2 spike-eiwit kan de fibrinolyse van ingespoten fibrine belemmeren en zou daarom een verklaring kunnen zijn voor de vorming van microklontjes. een verklaring zijn voor de vorming van microklonters in ernstige en langdurige COVID-19 [20]. Gegevens van Brogna en collega’s tonen aan dat Spikeiwit dat in de gastheer wordt geproduceerd als reactie op mRNA-vaccin, zoals afgeleid uit specifieke aminozuursubstituties, persisteert in bloedmonsters van 50% van de gevaccineerde personen gedurende 67 tot 187 dagen na mRNA-vaccinatie [23]. Een dergelijke langdurige blootstelling aan Spikeiwit werd eerder verondersteld voort te komen uit residuele virus reservoirs, maar blijkbaar kan dit ook optreden als gevolg van mRNA-vaccinatie.
Andere virussen uit verschillende families bevatten amyloïdogene eiwitten [1]. Van verschillende eiwitten van Influenza A, dat seizoensgriep veroorzaakt, is bijvoorbeeld bekend dat ze amyloïdogeen zijn. Recombinant tot expressie gebracht Pb1-F2 eiwit vormt amyloïd in vitro en in experimenteel geïnfecteerde cellen [24]. Influenza A niet-gestructureerd eiwit 1 (NS1) kan ook amyloïde vormen in vitro [25]. Er is aangetoond dat influenza A-infectie misvouwing van PrP induceert [26].
In de afgelopen 3 jaar zijn er verschillende casusrapporten gepubliceerd over de manifestatie van de ziekte van Creutzfeldt-Jakob (CJD) parallel aan een COVID-19-infectie of -vaccinatie [27, 28, 29, 30, 31, 32]. Onlangs werd door Stefano et al. gesuggereerd dat de omzetting van PrPC in PrPSc en de daaropvolgende mitochondriale disfunctie in aanmerking moet worden genomen bij de behandeling van de etiologie van lange COVID-19 [33].
Hoewel AD een zeer langzaam voortschrijdende ziekte is, zijn er al aanwijzingen die duiden op een verband tussen COVID-19-infectie en een lager risico op AD. Hersenatrofie kwam veel voor bij patiënten die besmet waren na COVID-19 voor vroege stammen [34]. Er werden postmortem Aβ-aggregaten gevonden in de hersenen van jonge COVID-19 geïnfecteerde patiënten [35]. COVID-19 opgelegd 1,69 verhoogd risico op een nieuwe diagnose van AD binnen 360 dagen bij een leeftijd >65 jaar [36].
Een recente in vitro studie toonde verhoogde Aβ1-42 fibrilvorming geïnduceerd door voorgevormde zaden van SARS-CoV-2 Spike-eiwit peptide 1058-1068 [37]. We volgen hier het concept van cross-seeding van ND eiwitten met SARS-CoV-2 Spike amyloïde fibrillen. Kruiskruising is een testbare hypothese en we hebben dit onderzocht in onze beproefde in vitro seeding assays door kruiskruising van humaan prioneiwit en Aβ1-42 peptide met zeven verschillende amyloïde fibrillen van
peptiden van het SARS-CoV-2 spike-eiwit.
Resultaten
We wilden bepalen of amyloïden afgeleid van het SARS-CoV-2 Spike eiwit een snellere fibrilvorming van respectievelijk het humane prioneiwit (HuPrP) en het humane Aβ peptide konden uitlokken. Daarom voegden we voorgevormde fibrillen toe van zeven verschillende 20-aminozuur lange peptiden afgeleid van amyloïdogene sequenties van SARS-CoV-2 Spike-eiwit (Wuhan-stam) [20] (Tabel 1), vanaf hier Spike-zaden genoemd met het nummer dat overeenkomt met de initiële aminozuursequentie in het spike-eiwit.
Tabel 1. Spike peptide sequenties gebruikt voor het maken van Spike fibril zaden
| Spike Peptide* | Aminozuursequentie** |
| Spike192 | FVFKNIDGYFKIYSKHTPIN |
| Spike258 | WTAGAAAYYVGYLQPRTFLLK |
| Spike365 | KKKGGGYSVLYNSASFSTFK |
| Spike532 | NLVKNKCVNFNGLTGTGV |
| Spike601 | GTNTSNQVAVLYQDVNCTEV |
| Spike685 | KKKRSVASQSIIAYTMSLGA |
| Spike1166 | LGDISGINASVVNIQKEIDR |
(Wuhan-stam) [20]. **Grijs gearceerd zijn niet-inheemse aminozuren geïntroduceerd voor oplosbaarheid.
Zaaien van HuPrP
Menselijke PrP werd bereid uit E. Coli zoals eerder beschreven [38]. Het eiwit werd verdund tot 5 uM, wat overeenkomt met 0,1 mg / ml. Het zaaien fibrillen werden toegevoegd aan 10% (0,01mg/ml) (Fig 1A) en 1% (0,001 mg/ml) (Fig 1B). Om de specificiteit van het seeding effect te bepalen, werden controlezaadjes van verschillende amyloïdogene eiwitten (insuline, lysozym, TTR, Aβ1-42) toegevoegd om een zaadconcentratie van 10% (0,01mg/ml) te bereiken. Fibrillatie werd gecontroleerd door het meten van de toename in ThT-fluorescentie in de tijd. De Spike-peptiden werden opgelost in hexafluoro-isopropanol (HFIP), een oplosmiddel dat de oppervlaktespanning beïnvloedt en daarom het grensvlak tussen lucht en water zou kunnen verstoren. het lucht-water grensvlak verstoren waarvan wordt voorspeld dat het belangrijk is bij de fibrillatie van HuPrP onder natieve omstandigheden. Daarom werd HFIP in overeenkomstige concentraties toegevoegd aan de ongezaaide reacties.
Toevoeging van 10% voorgevormde fibrillen van de zeven spikepeptiden verhoogde de fibrillatiesnelheid op één na (Fig 1A). Spike192 verhoogde de fibrillatiesnelheid van HuPrP niet. We zagen we ook een significant verschil in zaaiingsefficiëntie tussen de verschillende spikepeptidefibrillen (Fig 1A).
HFIP vertraagde, zoals voorspeld, de fibrillatiesnelheid van de ongezaaide HuPrP-reactie bij de hoogste concentratie, maar niet bij de lagere (Fig. 1A). hoogste concentratie, maar niet bij de lagere (zie Fig 1 A, B, C niet-uitgezaaide reacties).
Een 10-voudige verdunning van de spike zaden bijna volledig afgeschaft de seeding potentie van de spike peptide amyloïden (Fig 1B). Spike532 zaad behield echter nog steeds het vermogen om de vertragingstijd aanzienlijk te verminderen (Fig. 1B).
Controlereacties met verschillende goed bestudeerde amyloïden werden gebruikt om de algemene neiging van cross-seeding HuPrP te onderzoeken (Fig. 1C). De controlezaden werden aan HuPrP toegevoegd tot een uiteindelijke concentratie van 0,01 mg/ml in overeenstemming met de hoogste concentratie van spike peptide zaden. 0,001 mg/ml fibrillair HuPrP90-231 werd ook toegevoegd als positieve controle (zelfzaad). Insulinefibrillen verminderden de vertragingstijd van HuPrP-fibrillatie, terwijl fibrillen van lysozym, TTR en Aβ1-42 niet. Spike mix zaad bestaande uit een co-fibrillatie 14% (1/7e) van elk van de zeven spikepeptiden. Het zaad van de spikemix (totale concentratie van 0,01 mg/ml) resulteerde in een kleine maar significante afname van de HuPrP-fibrillatievertragingstijd (Fig. 1C).
Figuur 1: In vitro zaaien van HuPrP90-231 onder oorspronkelijke omstandigheden in aanwezigheid van Spike amyloid en controle zaden. 5 uM (overeenkomend met ~0,1 mg / ml) HuPrP werd onderworpen aan A) 0,01 mg / ml (10% w / w) Spike fibril amyloïde in aanwezigheid van 1% HFIP zoals vereist voor de bereiding van zaden. Gelijkwaardige hoeveelheid HFIP werd toegevoegd aan de reactie zonder zaad. B) 0,001 mg/ml (1% m/m) spikefibrillen in aanwezigheid van 0,1% HFIP zoals vereist voor de bereiding van de zaden. de zaden te bereiden. Een gelijke hoeveelheid HFIP werd toegevoegd aan de reactie zonder zaad C) 0,01 mg/ml (10% w/w) controlezaadjes van in vitro bereidingen van insuline, lysozym TTR en Aβ1-42. 0,001 mg/ml (1% w/w) HuPrP90- 231 uit een eerdere reactie (zelf zaad) en 0,01mg/ml gecoaggregeerde (1,4% w/w per samenstellende peptide) Spike mix werden toegevoegd als positieve controles. Aan de reactie zonder zaad werd geen HFIP toegevoegd. Elke reactie werd uitgevoerd in 10 herhalingen om de variabiliteit in de ongezaaide fibrillatiekinetiek aan te pakken. De reactie werd om de 15 minuten gecontroleerd met ThT-fluorescentie tijdens continu schudden. Lagetijd werd bepaald als het tijdstip waarop de ThT-intensiteit 10% van de maximale intensiteit voor dat spoor was gepasseerd.
Het zaaien van Aβ1-42
Aβ1-42 werd gebruikt als substraat om het zaai effect van spike peptide amyloïden te bepalen. De Aβ1-42 concentratie was 5 μM (0,022 mg/ml) en de spike peptide amyloïden en controlezaadjes werden toegevoegd om een eindconcentratie van 0,005 mg/ml te bereiken. We vonden dat alle zeven spike peptide amyloïden efficiënt de vorming van Aβ1-42 fibrillen versnelden (Fig 2A). Zoals het geval was geval was bij het zaaien van HuPrP is er een significant verschil tussen de zaai-efficiëntie tussen de verschillende spike peptide amyloïden. Aβ1-42 was echter gevoeliger voor Spike601. Om vast te stellen dat het seeding effect geen algemeen effect was gebaseerd op een algemene amyloïde structuur hebben we Aβ1-42 onderworpen aan een panel van controlezaadjes en vonden we geen versnelling van fibrilvorming voor insuline, lysozym of TTR (Fig 2B). Aβ1-42 fibrillen en een mix van alle zeven spike peptiden samen gefibrilleerd werden gebruikt als positieve controles en beide toonden zaaiactiviteit.
Figuur 2: In vitro zaaien van Aβ1-42 onder natieve omstandigheden in aanwezigheid van Spike amyloid en controle zaden. 5 μM (overeenkomend met ~0,022 mg/ml Aβ1-42) werd onderworpen aan A) 0,005mg/ml (20% w/w) Spike fibril amyloïde in aanwezigheid van 1% HFIP zoals vereist voor de bereiding van zaden. Een gelijke hoeveelheid HFIP werd toegevoegd aan de reactie zonder zaad. B) 0,01 mg/ml (20% w/w) controlezaden van in vitro bereidingen van insuline, lysozym en TTR. 0,0022 mg/ml (1% w/w) Aβ1-42 van een eerdere fibrillatiereactie (zelfzaad) en 0,01 mg/ml gecoaggregeerde (1,4% w/w per samenstellende peptide) Spike mix werden toegevoegd als positieve controles. Er werd geen HFIP toegevoegd aan de reactie zonder zaad. Elke reactie werd uitgevoerd in 4 herhalingen. De reactie werd gecontroleerd door ThT-fluorescentie om de derde minuut met 1 minuut schudden tussen elke meting. Vertragingstijd werd bepaald als het tijdstip waarop de ThT-intensiteit 10% van de maximale intensiteit voor dat spoor was gepasseerd.
TEM van geselecteerde tijdstippen in Aβ1-42 fibrillatie
Parallel aan het monitoren van de Aβ1-42 fibrilvorming door ThT, werden monsters van herhaalde reacties verzameld voor onderzoek met behulp van negatieve vlek transmissie-elektronenmicroscopie (TEM). Op tijdstip 120 min was de exponentiële groeifase voltooid voor alle geënte monsters. terwijl de niet-gezaaide monster was nog steeds in de eerste nucleatie fase (Fig 3A). Vertegenwoordiger TEM microfoto’s voor elk monster worden getoond in Fig 3B. De niet-gezaaide monster bevatte geen fibrillaire component, maar overvloedig oligomere structuren (Fig. 3B). Alle monsters die waren bezaaid met spike peptide amyloïden bevatten amyloïde fibrillen (Fig. 3B).
Figuur 3: Transmissie-elektronenmicroscopie van Aβ1-42 tijdens in vitro seeding door Spike amyloid onder neutrale omstandigheden. 5 μM (overeenkomend met ~0,022 mg/ml Aβ1-42) werd onderworpen aan 0,005mg/ml (20% w/w) Spike fibril amyloïde in aanwezigheid van 1% HFIP zoals vereist voor de bereiding van zaden. A) Gemiddelde van 4 kinetische sporen voor de reactie zonder zaad en voor elk van de reacties met zaad van Spike-amyloïd. De grijze stippellijn op 120 minuten verduidelijkt het tijdstip waarop alle uitgezaaide monsters de plateaufase van de amyloïdovergang ingaan terwijl de niet-gezaaide reactie (zwart) nog steeds geen amyloïdgehalte rapporteert door ThT-fluorescentie. B) toont representatieve TEM-beelden van alle reacties op tijdstip 120 minuten. De Aβ1-42 fibrillatiereacties werden gezaaid met het Spike-amyloïd dat boven elk beeld is aangegeven. Alle schaalbalken zijn 500 nm.
Discussie
De amyloïde fibril-vormingsreacties van recombinante eiwitten wordt gebruikt als een belangrijk onderzoeks hulpmiddel in het streven om veel amyloïde-geassocieerde ziekten te begrijpen. De reactie waarbij een eiwit wordt aangetast door een kleine hoeveelheid voorgevormde amyloïde fibrillen van dezelfde eiwitsequentie staat bekend als homologe zaaiing of zelfzaaiing. Het concept van homologe zaaiing van recombinant geproduceerde en gezuiverde eiwitten is goed ingeburgerd en de literatuur is uitgebreid. Zaaien met recombinant prioneiwit als substraat wordt gebruikt in de klinische diagnostiek van prionziekten en staat bekend als RT-QuiC [39]. Als de toegevoegde amyloïde fibrillen in plaats daarvan zijn samengesteld uit een andere fibril wordt dit heteroloog zaaien of kruisbestuiving genoemd. Het heterologe zaad kan een eiwit zijn met een enkele puntmutatie die verschilt van het substraat, hetzelfde eiwit maar van een andere soort, of een totaal ander eiwit maar met invloed op dezelfde ziekte [40]. Kruisbestuiving is zelden zo efficiënt als zelf-zaaiing. In veel gevallen leidt toevoeging van heterologe zaden de fibrilvorming van het Aβ peptide [41, 42] of het menselijke prioneiwit [42, 43] niet significant verhogen. Het concept van kruisbestuiving wordt momenteel onderzocht door vele laboratoria en voor verschillende ziekte-geassocieerde eiwitten en aminozuur complementariteit evenals en de gunstige tertiaire (driedimensionale) rangschikking van de amyloïde backbone zijn gesuggereerd als modulatoren van succes in heterologe zaaiing [44].
We tonen hier aan dat zowel het AD-geassocieerde peptide Aβ1-42 als het CJD geassocieerd menselijk prioneiwit gevoelig zijn voor kruisbestuiving met amyloïden afgeleid van het SARSCoV-2 Spike-eiwit. Voor HuPrP verkort het Spike532 amyloïd de vertragingstijd van amyloïdvorming aanzienlijk meer dan de andere zes peptide amyloïden en met name het Spike192 amyloïd induceerde geen aanzienlijke afname van de vertragingstijd. Het dramatische effect van het zaaien van Spike532 was dosisafhankelijk. (Alle Spike-peptidesequenties zijn te vinden in tabel 1)
Toevoeging van 10% (0,01 mg/ml in 0,1 mg/ml substraateiwit) Spike532 verkortte de vertragingstijd met bijna 80% van een mediaan van 712 minuten naar een mediaan van 135 minuten (Fig 1A). Een 10-voudige verdunning van de spikezaden werd de zaaiactiviteit van de spikepeptide amyloïden (fig 1B). Spike532 amyloïden hebben echter nog steeds het vermogen om de wachttijd aanzienlijk te de wachttijd aanzienlijk te verminderen, maar de 10-voudige verdunning verminderde de wachttijd met slechts 10% van een mediaan van 397 minuten tot een mediaan van 360 minuten. 0,01 mg/ml spikemix, overeenkomend met 0,0014 mg/ml van het respectieve peptide verkortte de vertragingstijd met 25%, van 405 minuten tot 307 minuten (fig. 1C)
Controlereacties met verschillende bekende en goed bestudeerde amyloïden werden gebruikt om de algemene neiging van cross-seeding menselijk prioneiwit (Fig 1C). De controlezaden werden toegevoegd aan HuPrP tot een eindconcentratie van 0,01 mg/ml in overeenstemming met de hoogste concentratie van spike peptide amyloïden. 0,001 mg/ml fibrillair HuPrP90-231 werd opgenomen als positieve controle. Spike mix, bestaande uit 14% (1/7e) van elk van de zeven samengevoegde spikepeptiden, vertoonde ook bij deze zeer lage afzonderlijke peptideconcentratie seeding activiteit. Insulinefibrillen verminderden de vertragingstijd van HuPrP-fibrillatie matig, terwijl fibrillen van lysozym, TTR en Aβ1-42 dat niet deden.
We selecteerden de Aβ1-42 peptide voor onze experimenten omdat deze het meest verbonden is met de pathofysiologie van AD pathofysiologie. Het monitoren van Aβ als ziekte biomarker in cerebrospinaal vocht is duidelijk dat Aβ1-42/40 ratio in het hersenvocht afneemt met toenemende ernst van de ziekte (45). Accumulatie van gegenereerde Aβ1-42 in amyloïde plaques in de hersenen, een moleculair sink effect dat voorkomt dat het peptide naar de liquor lekt, wordt beschouwd als een haalbare verklaring voor deze biomarker observatie. Dezelfde verschuiving in de verhouding tussen Aβ1-42 en Aβ1-40 werd gevonden bij COVID-19 patiënten met neurologische manifestaties in de eerste dagen van de SARS-CoV-2 pandemie (46). De auteurs gaven geen moleculaire verklaring voor de verminderde Aβ1-42/40 ratio in de COVID-19 gevallen, maar accumulatie van de Aβ1-42, voorbijgaand of persisterend, is een van de vele mogelijke verklaringen en er is meer onderzoek nodig om deze observatie te begrijpen.
In onze experimenten vonden we dat, net als het geval was voor cross-seeding van HuPrP, niet alle zeven Spike amyloïde peptiden dezelfde versnelling van Aβ1-42 fibrillatie oplegden. We vonden dat, in tegenstelling tot het geval voor HuPrP, al onze zeven geteste spike peptide amyloïden de tijd van fibrilvorming aanzienlijk verminderden. de tijd van fibrilvorming aanzienlijk verkortten, met name een toch al snelle ongezaaide reactie. Net als in het experiment met HuPrP viel één spikepeptide amyloïde op als meest actieve zaad. Intrigerend genoeg was deze volgorde verschillend was voor Aβ1-42 vergeleken met HuPrP. Terwijl Spike532 het meest efficiënt was in het zaaien van HuPrP, was Spike601 het meest efficiënt in het zaaien van Aβ1-42.
Het menselijke prioneiwit is berucht om zijn gevoeligheid voor zelfbevruchting en is tot op heden het enige eiwit met een onbetwist vermogen tot interindividuele overdracht. Aan de andere kant, is het zaaien van het HuPrP met amyloïden van heterologe sequenties echter moeilijk gebleken (42) (43).
Zowel het menselijke prioneiwit als het Aβ peptide zijn alomtegenwoordig in de menselijke hersenen maar correleren alleen met ziekte (respectievelijk sporadische CJD en AD) wanneer ze verkeerd gevouwen zijn. Tot op heden heeft de wetenschap echter niet kunnen verklaren waarom sommige mensen wel en anderen niet het slachtoffer worden van deze ziekten. De overdraagbare eigenschappen van PrP prionen zijn goed vastgesteld, terwijl die van de ziekte van Alzheimer nog steeds ter discussie staat.
De evolutionaire druk voor virale eiwitten om te streven naar volledige, succesvolle en uantitatieve eiwitvouwing is laag, zoals we onlangs hebben besproken in een review (1). Met een soortgelijke redenering, het ontbreken van co-evolutie tussen het menselijke en het virale proteoom, de mens minder beschermd tegen tegen kruisbesmetting door virale amyloïden dan tegen zelfgegenereerde amyloïden. Er is momenteel geen consensus over de etiologie van het grote aantal sporadische gevallen van ND in het algemeen. Onlangs hebben Jaunmuktane en collega’s gewezen op de enorme lengte van de incubatietijd tussen insult en ziekte voor vasculaire Aβ amyloïdose die vermoedelijk afkomstig is van AD donoren (47). Hierin, vermeende slachtoffers van iatrogene overdracht van Aβ amyloïd zaadjes gepresenteerd met Aβ amyloïdose wel meer dan 40 jaar na het ontvangen van een besmet dura mater transplantaat of nadat ze waren blootgesteld aan besmette neurochirurgische instrumenten. Als we dit samenvoegen met het rigoureuze onderzoek van Levine e.a. (2) met betrekking tot een blijvend verhoogd risico op neurodegeneratieve ziekten tientallen jaren na een virusinfectie pleit voor voor een intensivering van het onderzoek naar het concept van virusamyloïd als een potentiële uitlokkende factor voor eiwitmisvouwing en amyloïdvorming bij neurodegeneratieve ziekten. Verschillende recente meldingen van CJD die zich in de tijd manifesteren vlak na SARS-CoV-2 infectie of vaccinatie met SARS-CoV-2 Spike-eiwitderivaten (27,28,30,31,48) benadrukken ook de noodzaak om mogelijke verbanden te onderzoeken.
Experimentele procedures
Eiwitproductie en -zuivering
HuPrP
Alle experimenten met menselijk prioneiwit werden uitgevoerd in een BSL3-lab. Recombinant HuPrP werd tot expressie gebracht en gezuiverd zoals eerder beschreven (38)-RSET. In het kort, E Coli BL21/DE3 werden getransformeerd met p-RSET-A plasmide dat codeerde voor HuPrP90-231 met een N-terminale hexa-His-tag. De cellen werden gekweekt in een verrijkt medium (Terrific broth), geïnduceerd met IPTG bij OD~2 en 4 uur na inductie geoogst. De pellet werd geresuspendeerd in lysisbuffer met 10 mM Tris, 100 mM Na2HPO4 pH 8, 6 M GuHCl en opgeslagen bij -80 °C tot nodig. Op de dag van de zuivering werd de pellet ontdooid op ijs, werden de cellen gelyseerd door middel van sonicatie en werd het lysaat werd gezuiverd door centrifugeren bij 10 000 g 20 min.
NiNTA agarosekorrels (Qiagen) werden toegevoegd aan het lysaat, dat gedenatureerd eiwit bevatte. Na 30 minuten incubatie op de rotator werd de slurry in een kolom gegoten en werd de doorstroom weggegooid. De agarosekorrels werden gewassen met de lysisbuffer en het eiwit werd opnieuw gevouwen door een gradiëntmengsel van lysisbuffer met en zonder GuHCl toe te voegen. Uiteindelijk werd het eiwit geëlueerd met 10 mM Tris-HCl, 100 mM Na2HPO4, 500 mM imidazol, pH 5,8. Een tweede stap van zuivering door grootte exclusie chromatografie op een superdex75 16/60 kolom werd uitgevoerd om ervoor te zorgen dat alleen natuurlijk gevouwen monomere HuPrP werd gebruikt voor de daaropvolgende fibrillatie experimenten. Buffer F (50 mM Na2HPO4 (pH 7,4), 100 mM NaCl, 50 mM KCl) werd gebruikt als buffer.
Aβ1-42
Aβ peptiden werden gekocht bij rPeptide. De peptiden, door de fabrikant gevriesdroogd uit HFIP, werden geresuspendeerd in 6 M GuHCL en onderworpen aan grootte-uitsluitingschromatografie met een Superdex 75 10/300 GL. PBS (0,14 M NaCl, 2,7 mM KCl, 0,01 M fosfaat en 0,02% (w/v) NaN3 pH 7,4) werd gebruikt als buffer.
Voorbereiding van amyloïde zaden
Zaden van spikepeptiden
De spikepeptiden (tabel 1) werden op maat besteld en gesynthetiseerd door Genscript, Nederland zoals eerder beschreven in Nyström et al 2022 (20). Gevriesdroogd peptidepoeder werd opgelost in 100% hexafluoroisopropanol (HFIP) tot een initiële peptideconcentratie van 10 mg/ml. De peptiden, in totaal 20 aminozuren lang, werden verder verdund in steriele PBS tot 1 mg/ml en 10% HFIP. Een “spikemix” van alle zeven peptiden werd bereid door gelijke volumes van elk peptide van de 1 mg/ml concentratie te mengen. Monsters van elk peptide en de peptidemix werden geïncubeerd bij 37 °C in afgesloten 2 ml niet-behandelde plastic cryobuizen (Sarstedt) gedurende 24 uur en het amyloïdgehalte werd bepaald met ThT-fluorescentie en TEM (gegevens niet getoond).
TTR fibril zaden
Recombinant lichaamseigen tetrameer TTR-WT eiwit werd geëxpresseerd en gezuiverd zoals beschreven (49). Voor concentratiebepaling van tetrameer TTR gebruikten we een molaire extinctiecoëfficiënt van 73156 M-1 cm-1 bij 280 nm en een molecuulgewicht van 55570 g/mol. Het TTR werd gedialyseerd tegen milli-Q water bij 4 °C met behulp van een dialysebuis (Spectra/Por®, Spectrum Laboratories) met een molecuulgewicht cut-off (MWCO) van 12-14 kDa en geconcentreerd tot 5 mg/ml met spinfilters (Centriprep, Millipore) met een MWCO van 10 kD, bij 4 °C. Fibrilvorming van TTR-WT werd uitgevoerd zoals eerder beschreven (Groenning et al. 2015, PMID: 26108284). Fibrilvorming werd geïnduceerd door toevoeging van een voorraadoplossing van voorgekoeld (4 °C) 1 M azijnzuur, 2 M NaCl tot een eindconcentratie van 50 mM azijnzuur en 100 mM NaCl (eind-pH 3,0), aan 5 mg/ml TTR in milli-Q water. Monsters in verzegelbare 2 ml buisjes (Nunc) werden kort gemengd en bij 4 °C gedurende enkele maanden stilstaand geïncubeerd. Gevormde fibrillen werden geverifieerd door ThT fluorescentie en Congo rood birefringentie onder gepolariseerde microscopie. TTR-fibrilzaden werden verdund tot 0,2 mg/ml met PBS-buffer en werden gesonitiseerd in een waterbad voorafgaand aan zaadexperimenten.
Vlekken en CD-markers
Zaden van lysozymfibrillen
Fibrilzaden van lysozym werden geproduceerd volgens Mishra et al. 2007 (50). Gelyofiliseerd poeder van kippenei-eiwitlysozym (Sigma, L6876) werd opgelost in 25 mM HCl (pH 1,6) en gedialyseerd tegen 25 mM HCl (pH 1,6) bij 4 °C met een poreus membraan MWCO 3,5kD (Spectra/Por®, Spectrum Laboratories). De gedialyseerde eiwitoplossing werd gefiltreerd (0,45 μm poriegrootte filter, Millipore) en de eiwitconcentratie werd bepaald door extinctiemetingen bij 280 nm met extinctiecoëfficiënt ε = 37752 M-1 cm-1 moleculair gewicht van 14300 g/mol. Oplossingen werden bereid in verzegelbare 2 mL-buisjes (Nunc) door verdunning van eiwit met 25 mM HCl tot een uiteindelijke eiwitconcentratie van 2,86 mg/ml. Fibrilvorming van lysozym werd geïnduceerd door incubatie bij 65 °C gedurende een week. Gevormde fibrillen werden geverifieerd met ThT fluorescentie en Congo rood bireflectie onder gepolariseerde microscopie. Lysozym Fibrilzaden werden verdund tot 0,2 mg/ml met PBS-buffer en werden gesoneerd in een waterbad voorafgaand aan de experimenten.
Zaden van insulinefibrillen
Fibrilzaden van insuline werden geproduceerd volgens Nilsson et al. 2005 (51). Gelyofiliseerd poeder van runderinsuline (Sigma, I6634) werd opgelost in 25 mM HCl (pH 1,6) en werd gedialyseerd tegen 25 mM HCl (pH 1,6) bij 4 °C met behulp van een poreus membraan MWCO 3,5kD (Spectra/Por®, Spectrum Laboratories). De gedialyseerde eiwitoplossing werd gefiltreerd (0,45 μm poriegrootte filter, Millipore) en de eiwitconcentratie werd bepaald door absorptiemetingen bij 277 nm met extinctiecoëfficiënt ε = 5840 M-1 cm-1 , moleculair gewicht van 5780 g/mol. Oplossingen werden bereid in afsluitbare buisjes van 2 ml (Nunc) door verdunning van het eiwit met 25 mM HCl tot een uiteindelijke eiwitconcentratie van 1,85 mg/ml. Fibrilvorming van insuline werd geïnduceerd door incubatie bij 65 °C gedurende 24 uur. Gevormde fibrillen werden gecontroleerd door ThT-fluorescentie en Congo rood birefringentie onder gepolariseerde microscopie. Insulinefibrilzaden werden verdund tot 0,2 mg/ml met PBS-buffer en werden gesoneerd in een waterbad voorafgaand aan de zaadexperimenten.
Aβ1-42 zaden van fibrillen
Recombinante humane Aβ1-42 peptiden werden gekocht bij rPeptide (Watkinsville, GA, USA), en werden bereid volgens dezelfde methode als hierboven beschreven. De concentratie van Aβ1-42 werd ingesteld op 5 µM en het monster werd geïncubeerd bij 37 °C gedurende één nacht onder rustige omstandigheden.
Experimenten met kruiszaaiing
Fibrillatie van HuPrP
De eiwitconcentratie werd bepaald door Abs[280 nm] met extinctie coëfficiënt ε = 27,515 M-1 cm-1. Het eiwit werd verdund tot 6 µM in Buffer F en aangevuld met ThT tot een eindconcentratie van 2 µM. Aliquotes voldoende voor 6 herhalingen werden bereid voor elk experiment en Spike zaden of controle zaden werden toegevoegd aan de gewenste bereiken concentratie voor elk experiment. De herhalingsmonsters werden verdeeld in een onbehandelde zwarte 96-well plaat met transparante botton (Corning costar 3880) en stevig afgesloten met een aluminium folie en een transparante vinylfolie om verdamping van HFIP tijdens het experiment te voorkomen.
De fibrillatie werd uitgevoerd en gecontroleerd in een Tecan Saphire 2 plaatlezer. De plaat werd gedurende 13 minuten lineair geschud met hoge intensiteit en rustte vervolgens 2 minuten tijdens het meten. Voor meting werden de monsters geëxciteerd bij 440 nm en werd de intensiteit van de fluorescentie-emissie gemeten bij 480 nm. De vertragingstijd van elk experiment werd gedefinieerd als het eerste tijdstip waarop de fluorescentie-intensiteit meer dan 10% van de maximale intensiteit van dat monster bereikte. Er werd een tweemonster T-test gebruikt om de significantie van monsterverschillen te evalueren.
Fibrillatie van Aβ1-42
De concentratie van Aβ1-42 werd bepaald met behulp van de extinctiecoëfficiënt ε = 1,490 M-1 cm-1 (Abs[275 nm]-Abs[300 nm]) /1,490 M-1 cm-1 . Aβ1-42 werd verdund tot 5 µM en ThT werd toegevoegd tot een eindconcentratie van 2 µM. Spikezaadjes en controlezaadjes werden gedurende 20 minuten gesoneerd met behulp van een waterbadsonicatie en vervolgens werd aan elk monster de juiste concentratie toegevoegd. Een Tecan Infinite M1000 Pro plaatlezer werd gebruikt om de ThT-kinetiek te controleren excitatie bij 440 nm en emissie bij 480 nm werd gebruikt om de ThT-kinetiek te controleren. De metingen werden elke derde minuut uitgevoerd en elke derde minuut werd er gedurende 1 minuut geschud. Alle ThT-kinetiek werd uitgevoerd bij 37 °C in een Corning Costar 3880, 96 wells plaat. De vertragingstijd van elk experiment werd gedefinieerd als het eerste tijdstip waarop de intensiteit van de fluorescentie meer dan 10% van de maximale intensiteit van dat monster bereikte. Er werd een tweestalen T-test gebruikt om de significantie van monsterverschillen te evalueren.
Transmissie-elektronenmicroscopie
De hoeveelheid amyloïde fibrillen na 2 uur werd onderzocht met transmissie-elektronenmicroscopie (TEM). Fibrillatiereacties voor TEM werden parallel aan de plaatlezerreacties voorbereid met onbehandelde, goed afgesloten cryobuizen (Sarstedt). De buizen werden bewaard onder stilstaande omstandigheden bij 37°C in een incubator. Monsters voor TEM werden om het uur verzameld en de roosters werden onmiddellijk geprepareerd om de reactie te stoppen. Carbon-B roosters (formvar koolstof gecoat koper 400 mesh) van Ted Pella werden gebruikt. 5 µl van het fibrilmonster werd gedurende 2 minuten op een rooster geplaatst en het teveel werd verwijderd met behulp van filtreerpapier. Overgebleven zout werd van het rooster verwijderd door 5 µl milliQ-water aan het rooster toe te voegen en met filtreerpapier af te zuigen. Ten slotte werd 5 µl 2% waterig uranylacetaat gedurende 30 seconden op het rooster en werd de overmaat verwijderd met filtreerpapier. TEM-beelden werden verzameld met een Jeol JEM1400 Flash TEM die op 80 kV werkte.
Bron: Johan Larsson, Ebba Hellstrand, Per Hammarström, Sofie Nyström*
IFM-chemistry, Linköping University, Linköping Sweden
https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.09.01.555834v1.full.pdf
Referenties:
| 1 | Hammarstrom, P., and Nystrom, S. (2023) Viruses and amyloids – a vicious liaison. Prion 17, 82-104 |
| 2 | Levine, K. S., Leonard, H. L., Blauwendraat, C., Iwaki, H., Johnson, N., Bandres-Ciga, S., Ferrucci, L., Faghri, F., Singleton, A. B., and Nalls, M. A. (2023) Virus exposure and neurodegenerative disease risk across national biobanks. Neuron 111, 1086-1093 e1082 |
| 3 | Monje, M., and Iwasaki, A. (2022) The neurobiology of long COVID. Neuron 110, 3484-3496 |
| 4 | Vanderheiden, A., and Klein, R. S. (2022) Neuroinflammation and COVID-19. Curr Opin Neurobiol 76, 102608 |
| 5 | Soung, A. L., Vanderheiden, A., Nordvig, A. S., Sissoko, C. A., Canoll, P., Mariani, M. B., Jiang, X., Bricker, T., Rosoklija, G. B., Arango, V., Underwood, M., Mann, J. J., Dwork, A. J., Goldman, J. E., Boon, A. C. M., Boldrini, M., and Klein, R. S. (2022) COVID-19 induces CNS cytokine expression and loss of hippocampal neurogenesis. Brain 145, 4193-4201 |
| 6 | Almutairi, M. M., Sivandzade, F., Albekairi, T. H., Alqahtani, F., and Cucullo, L. (2021) Neuroinflammation and Its Impact on the Pathogenesis of COVID-19. Frontiers in Medicine 8 |
| 7 | Braga, J., Lepra, M., Kish, S. J., Rusjan, P. M., Nasser, Z., Verhoeff, N., Vasdev, N., Bagby, M., Boileau, I., Husain, M. I., Kolla, N., Garcia, A., Chao, T., Mizrahi, R., Faiz, K., Vieira, E. L., and Meyer, J. H. (2023) Neuroinflammation After COVID-19 With Persistent Depressive and Cognitive Symptoms. JAMA Psychiatry 80, 787-795 |
| 8 | Guzman-Martinez, L., Maccioni, R. B., Andrade, V., Navarrete, L. P., Pastor, M. G., and RamosEscobar, N. (2019) Neuroinflammation as a Common Feature of Neurodegenerative Disorders. Frontiers in Pharmacology 10 |
| 9 | Mohamed, W., Kumar, J., Alghamdi, B. S., Soliman, A.-H., and Toshihide, Y. (2023) Neurodegeneration and inflammation crosstalk: Therapeutic targets and perspectives. IBRO Neuroscience Reports 14, 95-110 |
| 10 | Kempuraj, D., Thangavel, R., Natteru, P. A., Selvakumar, G. P., Saeed, D., Zahoor, H., Zaheer, S., Iyer, S. S., and Zaheer, A. (2016) Neuroinflammation Induces Neurodegeneration. J Neurol Neurosurg Spine 1 |
| 11 | Kwon, H. S., and Koh, S.-H. (2020) Neuroinflammation in neurodegenerative disorders: the roles of microglia and astrocytes. Translational Neurodegeneration 9, 42 |
| 12 | Li, B., Chen, M., and Zhu, C. (2021) Neuroinflammation in Prion Disease. Int J Mol Sci 22 |
| 13 | Chaudhuri, P., Prajapati, K. P., Anand, B. G., Dubey, K., and Kar, K. (2019) Amyloid crossseeding raises new dimensions to understanding of amyloidogenesis mechanism. Ageing Res Rev 56, 100937 |
| 14 | Ren, B., Zhang, Y., Zhang, M., Liu, Y., Zhang, D., Gong, X., Feng, Z., Tang, J., Chang, Y., and Zheng, J. (2019) Fundamentals of cross-seeding of amyloid proteins: an introduction. J Mater Chem B 7, 7267-7282 |
| 15 | Subedi, S., Sasidharan, S., Nag, N., Saudagar, P., and Tripathi, T. (2022) Amyloid Cross-Seeding: Mechanism, Implication, and Inhibition. Molecules 27 |
| 16 | Mateu, M. G. (2013) Assembly, stability and dynamics of virus capsids. Arch Biochem Biophys 531, 65-79 |
| 17 | Charnley, M., Islam, S., Bindra, G. K., Engwirda, J., Ratcliffe, J., Zhou, J., Mezzenga, R., Hulett, M. D., Han, K., Berryman, J. T., and Reynolds, N. P. (2022) Neurotoxic amyloidogenic peptides in the proteome of SARS-COV2: potential implications for neurological symptoms in COVID19. Nat Commun 13, 3387 |
| 18 | Langenberg, T., Gallardo, R., van der Kant, R., Louros, N., Michiels, E., Duran-Romaña, R., Houben, B., Cassio, R., Wilkinson, H., Garcia, T., Ulens, C., Van Durme, J., Rousseau, F., and Schymkowitz, J. (2020) Thermodynamic and Evolutionary Coupling between the Native and Amyloid State of Globular Proteins. Cell Rep 31, 107512 |
| 19 | Tayeb-Fligelman, E., Bowler, J. T., Tai, C. E., Sawaya, M. R., Jiang, Y. X., Garcia, G., Griner, S. L., Cheng, X., Salwinski, L., Lutter, L., Seidler, P. M., Lu, J., Rosenberg, G. M., Hou, K., Abskharon, R., Pan, H., Zee, C.-T., Boyer, D. R., Li, Y., Anderson, D. H., Murray, K. A., Falcon, G., Cascio, D., Saelices, L., Damoiseaux, R., Arumugaswami, V., Guo, F., and Eisenberg, D. S. (2023) Low complexity domains of the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 form amyloid fibrils. Nature Communications 14, 2379 |
| 20 | Nyström, S., and Hammarström, P. (2022) Amyloidogenesis of SARS-CoV-2 Spike Protein. Journal of the American Chemical Society 144, 8945-8950 |
| 21 | Liao, D., Zhou, F., Luo, L., Xu, M., Wang, H., Xia, J., Gao, Y., Cai, L., Wang, Z., Yin, P., Wang, Y., Tang, L., Deng, J., Mei, H., and Hu, Y. (2020) Haematological characteristics and risk factors in the classification and prognosis evaluation of COVID-19: a retrospective cohort study. Lancet Haematol 7, e671-e678 |
| 22 | Antonioli, L., Fornai, M., Pellegrini, C., and Blandizzi, C. (2020) NKG2A and COVID-19: another brick in the wall. Cellular & Molecular Immunology 17, 672-674 |
| 23 | Brogna, C., Cristoni, S., Marino, G., Montano, L., Viduto, V., Fabrowski, M., Lettieri, G., and Piscopo, M. (2023) Detection of recombinant Spike protein in the blood of individuals vaccinated against SARS-CoV-2: Possible molecular mechanisms. Proteomics Clin Appl, e2300048 |
| 24 | Chevalier, C., Al Bazzal, A., Vidic, J., Fevrier, V., Bourdieu, C., Bouguyon, E., Le Goffic, R., Vautherot, J. F., Bernard, J., Moudjou, M., Noinville, S., Chich, J. F., Da Costa, B., Rezaei, H., and Delmas, B. (2010) PB1-F2 influenza A virus protein adopts a beta-sheet conformation and forms amyloid fibers in membrane environments. J Biol Chem 285, 13233-13243 |
| 25 | Shaldzhyan, A. A., Zabrodskaya, Y. A., Baranovskaya, I. L., Sergeeva, M. V., Gorshkov, A. N., Savin, II, Shishlyannikov, S. M., Ramsay, E. S., Protasov, A. V., Kukhareva, A. P., and Egorov, V. V. (2021) Old dog, new tricks: Influenza A virus NS1 and in vitro fibrillogenesis. Biochimie 190, 50-56 |
| 26 | Hara, H., Chida, J., Uchiyama, K., Pasiana, A. D., Takahashi, E., Kido, H., and Sakaguchi, S. (2021) Neurotropic influenza A virus infection causes prion protein misfolding into infectious prions in neuroblastoma cells. Sci Rep 11, 10109 |
| 27 | Young, M. J., O’Hare, M., Matiello, M., and Schmahmann, J. D. (2020) Creutzfeldt-Jakob disease in a man with COVID-19: SARS-CoV-2-accelerated neurodegeneration? Brain Behav Immun 89, 601-603 |
| 28 | Tayyebi, G., Malakouti, S. K., Shariati, B., and Kamalzadeh, L. (2022) COVID-19-associated encephalitis or Creutzfeldt-Jakob disease: a case report. Neurodegener Dis Manag 12, 29-34 |
| 29 | Olivo, S., Furlanis, G., Buoite Stella, A., Fabris, M., Milanic, R., Zanusso, G., and Manganotti, P. (2023) Rapidly evolving Creutzfeldt-Jakob disease in COVID-19: from early status epilepticus to fatal outcome. Acta Neurol Belg 123, 1553-1556 |
| 30 | Bernardini, A., Gigli, G. L., Janes, F., Pellitteri, G., Ciardi, C., Fabris, M., and Valente, M. (2022) Creutzfeldt-Jakob disease after COVID-19: infection-induced prion protein misfolding? A case report. Prion 16, 78-83 |
| 31 | Ciolac, D., Racila, R., Duarte, C., Vasilieva, M., Manea, D., Gorincioi, N., Condrea, A., Crivorucica, I., Zota, E., Efremova, D., Crivorucica, V., Ciocanu, M., Movila, A., and Groppa, S. A. (2021) Clinical and Radiological Deterioration in a Case of Creutzfeldt-Jakob Disease following SARS-CoV-2 Infection: Hints to Accelerated Age-Dependent Neurodegeneration. Biomedicines 9 |
| 32 | Alloush, T. K., Alloush, A. T., Abdelazeem, Y., Shokri, H. M., Abdulghani, K. O., and Elzoghby, A. (2023) Creutzfeldt-Jakob disease in a post-COVID-19 patient: did SARS-CoV-2 accelerate the neurodegeneration? Egypt J Neurol Psychiatr Neurosurg 59, 69 |
| 33 | Stefano, G. B., Büttiker, P., Weissenberger, S., Anders, M., Raboch, J., Ptacek, R., and Kream, R. M. (2023) Potential Prion Involvement in Long COVID-19 Neuropathology, Including Behavior. Cellular and Molecular Neurobiology 43, 2621-2626 |
| 34 | Douaud, G., Lee, S., Alfaro-Almagro, F., Arthofer, C., Wang, C., McCarthy, P., Lange, F., Andersson, J. L. R., Griffanti, L., Duff, E., Jbabdi, S., Taschler, B., Keating, P., Winkler, A. M., Collins, R., Matthews, P. M., Allen, N., Miller, K. L., Nichols, T. E., and Smith, S. M. (2022) SARSCoV-2 is associated with changes in brain structure in UK Biobank. Nature |
| 35 | Priemer, D. S., Rhodes, C. H., Karlovich, E., Perl, D. P., and Goldman, J. E. (2022) Abeta Deposits in the Neocortex of Adult and Infant Hypoxic Brains, Including in Cases of COVID-19. J Neuropathol Exp Neurol 81, 988-995 |
| 36 | Wang, L., Davis, P. B., Volkow, N. D., Berger, N. A., Kaelber, D. C., and Xu, R. (2022) Association of COVID-19 with New-Onset Alzheimer’s Disease. J Alzheimers Dis 89, 411-414 |
| 37 | Cao, S., Song, Z., Rong, J., Andrikopoulos, N., Liang, X., Wang, Y., Peng, G., Ding, F., and Ke, P. C. (2023) Spike Protein Fragments Promote Alzheimer’s Amyloidogenesis. ACS Appl Mater Interfaces 15, 40317-40329 |
| 38 | Sandberg, A., and Nystrom, S. (2018) Purification and Fibrillation of Recombinant Human Amyloid-beta, Prion Protein, and Tau Under Native Conditions. Methods Mol Biol 1779, 147- 166 |
| 39 | Peden, A. H., McGuire, L. I., Appleford, N. E. J., Mallinson, G., Wilham, J. M., Orru, C. D., Caughey, B., Ironside, J. W., Knight, R. S., Will, R. G., Green, A. J. E., and Head, M. W. (2012) Sensitive and specific detection of sporadic Creutzfeldt-Jakob disease brain prion protein using real-time quaking-induced conversion. J Gen Virol 93, 438-449 |
| 40 | Mandal, P. K., Pettegrew, J. W., Masliah, E., Hamilton, R. L., and Mandal, R. (2006) Interaction between Aβ Peptide and α Synuclein: Molecular Mechanisms in Overlapping Pathology of Alzheimer’s and Parkinson’s in Dementia with Lewy Body Disease. Neurochemical Research 31, 1153-1162 |
| 41 | Liang, R., Tian, Y., and Viles, J. H. (2022) Cross-seeding of WT amyloid-beta with Arctic but not Italian familial mutants accelerates fibril formation in Alzheimer’s disease. J Biol Chem 298, 102071 |
| 42 | R., Langenberg, T., Siemons, M., Nyström, S., Young, L. J., Laine, R. F., Young, L., Radaelli, E., Benilova, I., Kumar, M., Staes, A., Desager, M., Beerens, M., Vandervoort, P., Luttun, A., Gevaert, K., Bormans, G., Dewerchin, M., Van Eldere, J., Carmeliet, P., Vande Velde, G., Verfaillie, C., Kaminski, C. F., De Strooper, B., Hammarström, P., Nilsson, K. P., Serpell, L., Schymkowitz, J., and Rousseau, F. (2016) De novo design of a biologically active amyloid. Science 354 |
| 43 | Nystrom, S., and Hammarstrom, P. (2015) Generic amyloidogenicity of mammalian prion proteins from species susceptible and resistant to prions. Sci Rep 5, 10101 |
| 44 | Morales, R., Moreno-Gonzalez, I., and Soto, C. (2013) Cross-seeding of misfolded proteins: implications for etiology and pathogenesis of protein misfolding diseases. PLoS Pathog 9, e1003537 |
| 45 | Hansson, O., Lehmann, S., Otto, M., Zetterberg, H., and Lewczuk, P. (2019) Advantages and disadvantages of the use of the CSF Amyloid β (Aβ) 42/40 ratio in the diagnosis of Alzheimer’s Disease. Alzheimer’s Research & Therapy 11, 34 |
| 46 | Ziff, O. J., Ashton, N. J., Mehta, P. R., Brown, R., Athauda, D., Heaney, J., Heslegrave, A. J., Benedet, A. L., Blennow, K., Checkley, A. M., Houlihan, C. F., Gauthier, S., Rosa-Neto, P., Fox, N. C., Schott, J. M., Zetterberg, H., Benjamin, L. A., and Paterson, R. W. (2022) Amyloid processing in COVID-19-associated neurological syndromes. Journal of Neurochemistry 161, 146-157 |
| 47 | Jaunmuktane, Z., Banerjee, G., Paine, S., Parry-Jones, A., Rudge, P., Grieve, J., Toma, A. K., Farmer, S. F., Mead, S., Houlden, H., Werring, D. J., and Brandner, S. (2021) Alzheimer’s disease neuropathological change three decades after iatrogenic amyloid-beta transmission. Acta Neuropathol 142, 211-215 |
| 48 | Olivo, S., Furlanis, G., Buoite Stella, A., Fabris, M., Milanic, R., Zanusso, G., and Manganotti, P. (2022) Rapidly evolving Creutzfeldt-Jakob disease in COVID-19: from early status epilepticus to fatal outcome. Acta Neurol Belg, 1-4 |
| 49 | Begum, A., Zhang, J., Derbyshire, D., Wu, X., Konradsson, P., Hammarstrom, P., and von Castelmur, E. (2023) Transthyretin Binding Mode Dichotomy of Fluorescent trans-Stilbene Ligands. ACS chemical neuroscience 14, 820-828 |
| 50 | Mishra, R., Sorgjerd, K., Nystrom, S., Nordigarden, A., Yu, Y. C., and Hammarstrom, P. (2007) Lysozyme amyloidogenesis is accelerated by specific nicking and fragmentation but decelerated by intact protein binding and conversion. J Mol Biol 366, 1029-1044 |
| 51 | Nilsson, K. P., Herland, A., Hammarstrom, P., and Inganas, O. (2005) Conjugated polyelectrolytes: conformation-sensitive optical probes for detection of amyloid fibril formation. Biochemistry 44, 3718-3724 |
Categorie: COVID-19
Tags: Alzheimer, Creutzfeldt-Jakob, SARSCoV-2, COVID-19,
Eén reactie op “Spikeiwit gelinkt aan het versnellen van Alzheimer”
-
Mijn vermoeden is dat in de griepspuiten ook iets zit om alzheimer en parkinson te krijgen. Ik zie een toename van deze ziektes. En onze voeding word teveel rotzooi in gestopt.Wat ze de dieren inspuiten krijgen wij op ons bord gelijk de wat de boeren op ons eten spuiten!
Beheerder Vincent W Schoers
Copyright © 2021 door zorgdatjenietslaapt.nl. Toestemming tot gehele of gedeeltelijke herdruk wordt graag verleend, mits volledige creditering en een directe link worden gegeven.
Mijn lichaam is geen eigendom van de staat. Ik heb de uitsluitende en exclusieve autonomie over mijn lichaam en geen enkele politicus, ambtenaar of arts heeft het wettelijke of morele recht om mij te dwingen een niet-gelicentieerd, experimenteel vaccin of enige andere medische behandeling of procedure te ondergaan zonder mijn specifieke en geïnformeerde toestemming. De beslissing is aan mij en aan mij alleen en ik zal mij niet onderwerpen aan chantage door de overheid of emotionele manipulatie door de media, of zogenaamde celebratie influencers.
Alles hier gepubliceerd reflecteert de mening, ziens-, denkwijze van de gene die het plaatst
Geef een reactie